Descripción:
La TURBO DNasa escinde el ADN bicatenario de forma no específica para dejar oligodesoxinucleótidos fosforilados en 5'. Tiene mayor afinidad para la unión al ADN y permanece activa en presencia de sal.
Nota: este producto es solo la enzima. Si desea esta enzima más reactivos para inactivar la enzima y eliminar los cationes divalentes después de la digestión, consulte el kit TURBO DNA- free ™ .
Las características de la TURBO DNasa incluyen:
• Hasta 50 veces más actividad y un 350 % más de eficiencia catalítica
• Degrada eficazmente el ADN en soluciones que contienen hasta 0,25 M de sal
• Digiere eficazmente el ADN en oligonucleótidos
• Muy superior en la limpieza de plantillas de ADN de reacciones de transcripción in vitro
• Libre de ARNasa y de origen recombinante
Uso de la TURBO DNasa
La DNasa I se usa comúnmente para limpiar la contaminación del ADN de las muestras de ARN antes de la RT-PCR. La DNasa I convencional tiene poca afinidad por el ADN y escinde el ADN de baja concentración de forma muy ineficiente. Además, la DNasa I es muy sensible a la sal; tan solo 20 mM de NaCl pueden reducir la actividad de la enzima en un 30 %. Finalmente, la DNasa I se purifica a partir de páncreas bovino, una de las fuentes naturales más ricas de RNasa A. La amenaza de contaminar la actividad de la RNasa en las preparaciones de DNasa I requiere que la enzima se purifique exhaustivamente. A pesar de estas limitaciones, la DNasa I que utilizan los investigadores hoy en día es la misma enzima que Kunitz caracterizó por primera vez hace más de medio siglo.
Una DNasa diferente con propiedades superiores a la DNasa I de tipo silvestre,
la TURBO DNasa, se desarrolló utilizando un enfoque de ingeniería de proteínas que introdujo cambios de aminoácidos en el bolsillo de unión al ADN de la DNasa I de tipo silvestre. Estos cambios aumentan notablemente la afinidad de la proteína por el ADN. El resultado es una enzima versátil con una K m 6 veces menor para el ADN y la capacidad de mantener al menos el 50 % de la actividad máxima en soluciones que se aproximan a 200 mM de sal monovalente, incluso cuando la concentración de ADN está en el rango nanomolar (nM). Cuando las reacciones de transcripción in vitro se tratan con DNasa I o TURBO DNasa, TURBO DNasa elimina 63 veces más del molde de ADN plasmídico de entrada que la enzima de tipo silvestre. La capacidad de TURBO DNasa para unirse a concentraciones muy bajas de ADN significa que la enzima es particularmente eficaz para eliminar trazas de contaminación de ADN. Esto se vuelve importante para la eliminación completa de ADN de una muestra, ya que el sustrato de ADN escindible se reduce a medida que avanza la reacción de DNasa. Por lo tanto, TURBO DNasa tiene una ventaja funcional sobre la DNasa de tipo silvestre debido a su mayor afinidad por el ADN. Esto se aprovecha mejor en aplicaciones de RT-PCR, donde incluso unas pocas copias de ADN pueden dar lugar a un resultado falso positivo por PCR.
Detalles:
País de origen: Estados Unidos
Tipo de industria: Investigación
Paquete: Kit 1000u
Características: Enzima para PCR
Almacenamiento: -20°C
Garantía: Por defecto directo CTR
Marca: Invitrogen
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